加急见刊

pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA真核表达干扰载体构建与鉴定

朱家佳; 龙鼎新 南华大学公共卫生学院; 湖南衡阳421001

摘要：目的利用RNA干扰技术构建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体,并在Hela细胞中鉴定。方法针对目的基因人的CAPNS1基因(NM_001749),设计shRNA序列,以pYr-Lvsh为载体,构建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体;干扰载体转染Hela细胞,利用荧光定量PCR检测CAPNS1mRNA表达情况;荧光分光光度检测calpain活性;Western-blot检测相关蛋白含量。结果结果发现,载体酶切及测序结果显示pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体构建成功;qPCR显示与对照组相比,shRNA组CAPNS1表达受到抑制,CAPNS1-sh的干扰效率为50.30%;calpain活性检测显示shRNA组calpain活性下降并且CAPNS1、calpain1和calpain2蛋白含量下降。结论结果表明pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体成功构建,并在Hela细胞中有效干扰CAPNS1表达。

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