加急见刊

进境苹果中3种检疫性真菌三重PCR同步检测方法的建立

田沂民; 张露茜; 葛立傲; 焦彬彬; 胡培龙; 徐飞; 于翠; 杨翠云 上海海关; 上海200135; 上海市晋元高级中学附属学校; 上海市金山区蔬菜技术推广中心

摘要：苹果壳色单隔孢溃疡病菌（Botryosphaeria stevensii）、美澳型核果褐腐病菌（Monilinia fructicola）和丁香疫霉病菌（Phytophthora syringae）是为害多种水果和其他植物的重要检疫性真菌,均能侵染苹果果实导致烂果,并造成严重的经济损失。本研究设计和筛选了3对特异性引物,建立了同步检测3种检疫性真菌的普通PCR和三重PCR方法。设计的引物Bs-368 F/R、M.cola 986F/R和Psy1/Psy2能分别特异性地扩增出B.stevensii、M.fructicola和P.syringae所有供试菌株的DNA,而对相应多个近似种的DNA则无扩增。灵敏度试验结果表明,上述3对引物分别检测B.stevensii、M.fructicola和P.syringae DNA的灵敏度是41.7 pg、47.4 pg和0.375 pg,三重PCR同时检测到3种病菌DNA的灵敏度是4.44 ng。该方法可以满足对进境苹果果实携带的苹果壳色单隔孢溃疡病菌、美澳型核果褐腐病菌和丁香疫霉病菌的快速初筛,加速进境新鲜水果的快检快放。

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