加急见刊

重组质粒pGEM-HERV-Kgag的构建与鉴定

张宗彦; 张雯; 刘妙龄; 贲亚琍 江汉大学医学院免疫疾病研究所; 湖北武汉430000; 江汉大学学生工作部; 湖北武汉430000

摘要：目的 构建pGEM-HERV-K gag 重组质粒.方法： 分离人外周血单核细胞,提取总RNA,逆转录得到cDNA,PCR扩增目的基因后回收并纯化目的基因,TA基因克隆方法构建重组质粒,并采用酶切和PCR进行鉴定.结果： 以PBMC的cD？NA为模板,PCR扩增获得446 bp 的HERV-K gag 目的基因,克隆到pGEM-T载体构建pGEM-HERV-K gag 重组质粒,酶切及PCR结果证实重组质粒构建成功.结论： 成功构建pGEM-HERV-K gag 质粒,此方法可用于比较病人与健康人的gag 基因的序列.

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