加急见刊

Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备

张勇侠; 高雅丽; 康庄; 丛聪; 罗心梅; 代云见; 陈宗香; 李立; 李桂华; 刘兰军 成都生物制品研究所有限责任公司重组蛋白药物及新疫苗研究室; 四川成都610023

摘要：目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白（NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A）,将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。

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