加急见刊

实时逆转录PCR检测G1、G2和G4型轮状病毒方法的建立

王云瑾; 王名强; 傅生芳; 周旭; 白慕群; 胡广宏; 寇桂英; 包红; 陈玥如; 马超 兰州生物制品研究所有限责任公司第二研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心; 甘肃兰州730046; 上海生物制品研究所有限责任公司; 上海200052

摘要：目的建立3种用于检测G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因的一步法实时逆转录PCR,用于本实验室G1、G2和G4型轮状病毒的快速检测和定量、定性分析。方法设计G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因特异性引物和探针,采用G1、G2和G4型轮状病毒特异性体外转录RNAs,建立实时逆转录PCR,特异性检测G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因方法。结果 3种实时逆转录PCR标准曲线R~2均大于0.99,扩增效率均在90%～110%之间。不同浓度体外转录RNAs重复性检测结果 CV均〈5%,且可以对单拷贝RNAs样本进行检测。结论本检测方法快速、灵敏且重复性好,可以对轮状病毒VP7基因进行特异而有效的检测,为实验室轮状病毒毒株的分型和定量检测提供了特异而有效的检测方法,也为今后多重实时逆转录PCR的建立奠定了试验基础。

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