百日咳鲍特菌脂寡糖的制备及寡糖结合物在小鼠体内免疫原性研究
摘要：目的提取纯化百日咳鲍特菌（简称百日咳杆菌）脂寡糖（lipo-oligosaccharides,LOS）,制备百日咳杆菌多糖蛋白结合物,并分析其理化性质及免疫原性。方法通过改良热酚水法提取百日咳杆菌的LOS,采用酶解法纯化LOS,通过1%冰醋酸水解获得寡糖（oligosaccharides,OS）,产物经Tricine-SDS-PAGE及核磁共振氢谱（^1H NMR）鉴定。OS的羟基经1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯（1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP）活化后,与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物（TTAH））共价结合,制备多糖蛋白结合物,经Sephacryl S-300层析柱纯化后收集结合物原液,并对结合物的理化性质、抗原性进行分析,采用两种剂量（2.5μg/剂和5.0μg/剂）免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。结果纯化后LOS纯度〉90%,核磁共振结果表明OS结构正确,功能基团得到保留。制备的结合物抗原性未发生改变,经3针免疫后,两种剂量下结合物均有剂次加强效应（P〈0.05）,且两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论将百日咳杆菌OS与TTAH结合是制备百日咳杆菌多糖蛋白结合疫苗的可行途径,并且结合物在小鼠体内具有良好的免疫应答。
注: 保护知识产权,如需阅读全文请联系微生物学免疫学进展杂志社
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