EB病毒基因Z2A原核表达载体的构建及表达
摘要：目的构建能分泌性表达EB病毒（Epstein—Barrvirus，EBV）融合基因Z2A的BCG重组质粒并导入BCG。方法分别以BCG和EBV融合基因eDNA为模板，通过PCR扩增得到139bp的BCG—Ag85B信号肽序列和2291bp的Z2A基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌一BCG穿梭表达载体pMV261重组，得到重组质粒pMVSo再将EBV融合基因序列Z2A亚克隆至pMVS中，得到重组质粒pMVZ2A，电转化导入BCG，采用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳对表达产物进行分析。结果构建的重组质粒pMVZ2A经双酶切、PCR扩增及序列测定证实，克隆基因BCG-Ag85B信号肽和Z2A正确插入载体pMV261。重组质粒pMVZ2A电转化导入BCG后能在BCG中有效表达相应蛋白。结论构建的重组质粒pMVZ2A能在BCG中表达相应蛋白。这一结果为改造BCG及发展新型抗EBV和结核杆菌的双价疫苗奠定了基础。
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