加急见刊

创伤弧菌溶细胞素特定氨基酸序列分析及其人源化单链抗体筛选

潘振; 吕鹏; 邵淑丽; 毕艳梅; 孙梅; 曲业敏; 陈英剑; 王明义; 胡成进 锦州医科大学研究生学院; 锦州121001; 江苏大学生命科学研究院; 镇江212013; 威海市立医院中心实验室; 威海264200; 济南军区总医院实验诊断科; 济南250031

摘要：本研究利用生物信息学方法分析创伤弧菌（vibrio vulnificus, V.vulnificus）溶细胞素的蓖麻毒素结构域内氨基酸序列并合成多肽,筛选人工合成的单链抗体噬菌体文库Tomlinson I＋J,为创伤弧菌感染的抗体阻断治疗研究奠定基础。通过对未经处理的大容量Tomlinson I＋J噬菌体文库进行3轮特异性亲和筛选,从中筛到特异性结合溶细胞素多肽的克隆,命名为scFv-D2,经氨基酸序列分析验证其含有完整的人源化抗体重链和轻链可变区。将scFv-D2克隆转化E.coli HB2151并诱导表达,用ELISA方法检测其可溶性scFv片段与溶细胞素毒性多肽的结合活性。结果显示从Tomlinson I＋J文库成功筛选出一株具有结合活性的人源化噬菌体单链抗体,可用于创伤弧菌感染抗体阻断治疗策略的研究。

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