产气荚膜梭菌α毒素C末端的二拷贝串联表达与免疫原性分析
摘要：本研究旨在获得产气荚膜梭菌α毒素(CPA)C末端(第247-370位氨基酸,CPAC)二拷贝串联融合蛋白,并评价其免疫原性。对已知的A型产气荚膜梭菌CPAC编码基因进行优化设计,将其以同向串连的方式串联成二拷贝基因(GCPAC2),经人工合成获得基因片段GCPAC2。将GCPAC2克隆至原核表达载体pET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rCPAC2。利用Western Blot方法检测rCPAC2与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性。随后,用rCPAC2免疫家兔,并检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。在二免21 d后,经耳缘静脉注射1个家兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素,检测rCPAC2对家兔的免疫保护效果。结果表明,rCPAC2主要以包涵体的形式表达且能与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应。每毫升的一免和二免抗血清分别可中和30个和80个小鼠MLD的A型产气荚膜梭菌毒素。1个兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组4/4死亡,免疫组得到了100%(4/4)的保护。以上结果说明,rCPAC2具有良好的免疫原性,从而为A型产气荚膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的实验数据。
注: 保护知识产权,如需阅读全文请联系中国兽医杂志社
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