恶性血液病自体造血干细胞移植后DCCIK细胞预防复发研讨

作者：王玲 史春雷 李颖 袁成录

【摘要】 目的 探讨恶性血液病自体造血干细胞移植后应用树突状细胞细胞因子诱导的杀伤细胞（DCCIK）预防复发的效果。方法 12例恶性血液病病人自体造血干细胞移植后静脉输注及腹股沟注射DCCIK 细胞2～3次，观察疾病的复发情况以及DCCIK 细胞输注后的副作用。结果 7例持续完全缓解（CR），中位CR期44（32～56）月。4例死亡，其中3例复发。结论 DCCIK细胞治疗可能有助于清除微小残留病，预防疾病复发，延长病人生存期，且副作用小，临床可以选用DCCIK细胞预防自体造血干细胞移植后恶性血液病的复发。 【关键词】 DCCIK细胞；造血干细胞移植；移植，自体；复发 ［ABSTRACT］ Objective To observe the clinical efficacy of dendritic cells in combination with cytokineinduced killer cells (DCCIK) to prevent recurrence of malignant hematopathy after autohematopoietic stem cell transplantation (AutoHSCT).Methods After autoHSCT， 12 patients with malignant hematopathy were treated with DCCIK cells intravenously and intradermally for 2-3 times a week. The recurrence and side effects DCCIK were followed up. Results Complete remission (CR) was found in seven patients， the median CR period was 44 (range 32-56) months， four died， in which， recurrence was note in three patients. Conclusion Treatment with DCCIK cells may be helpful in clearing minimal residual disease， preventing relapse and prolonging the patients’ life with less side effects， which can be used to prevent recurrence of malignant hematopathy after autoHSCT. ［KEY WORDS］ DCCIK cells; hematopoietic stem cell transplantation; transplantation， antologous; recurrence 自体造血干细胞移植是治疗恶性血液病的有效方法之一，自体造血干细胞移植可以将化疗剂量提高到致死量，从而达到减少残留病、降低复发率的作用。但是因为大剂量化疗后仍然存在微小残留病，不能完全解决移植后复发的问题，使得自体造血干细胞移植的应用受到一定限制。国内外采用体内外净化的方法去除移植物中部分残留的肿瘤细胞，但因为造价昂贵、植活时间延长等原因导致净化方法不能广泛应用。我院自2004年8月以来，对12例恶性血液病病人在自体造血干细胞移植后应用自体树突状细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(DCCIK)治疗，观察其预防复发的效果以及副作用。现将结果报告如下。 1 资料和方法 1.1 一般资料 12例病人中，男8例，女4例，中位数年龄48（13～56）岁。其中急性白血病4例，分别为急性非淋巴细胞白血病（ALL）2例，急性淋巴细胞白血病2例；非霍奇金淋巴瘤6例;霍奇金淋巴瘤1例；多发性骨髓瘤1例。 1.2 DC和CIK细胞诱导方法 1.2.1 细胞诱导和采集 用IL2(山东泉港药业有限公司生产)100万单位+生理盐水静脉滴注，每天1次，连续诱导5 d。诱导结束后4 d，使用细胞分离单采机采集病人外周血单个核细胞。如果单个核细胞计数低于0.4×109/L，则用GMCSF 150 μg皮下注射，每天1次，连续注射1～3 d，然后再进行细胞采集。 1.2.2 细胞采集 使用细胞分离单采机（SPECTRA 6.0，COBE公司，美国）采集病人外周静脉血6～8 L，每120～150 mL血浆约采集(3～6)×109单个核细胞。 1.2.3 抗原制备方法 根据肿瘤类型选择相同病理类型的人肿瘤细胞株制备抗原，细胞株均购自中国科学院上海生物科学院细胞资源中心。将肿瘤细胞株培养至(1～2)×108个，收集细胞，生理盐水洗涤。将细胞置于RPMI 1640培养液中反复冻融，离心去残渣，上清液过滤备用。 1.2.4 DC和CIK细胞制备 采集的细胞按照常规方法分离并洗涤单个核细胞，调整细胞的密度至1×1010/L，平均加到16只细胞培养瓶（美国BD公司）中，于37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育2 h，使贴壁细胞和悬浮细胞分离。取出悬浮细胞置另外细胞培养瓶中备用。在含有大量贴壁细胞的培养瓶中加入含有20 μg/L IL4、50 μg/L GMCSF的DC无血清培养基（德国CellGenix公司），在37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育，6 d后加入DC培养液和相应的肿瘤抗原继续培养2 d，即为成熟DC，部分回输，其余冻存。悬浮细胞的培养瓶中加入适量RPMI 1640培养液、灭活胎牛血清和IL2、 IFNα、CD3单抗（美国R&D公司）细胞因子等，在37 ℃体积分数0.05的CO2条件下培养。第8天细胞部分静脉回输，余细胞继续培养至15 d。 1.2.5 细胞表型检测和细胞计数 培养结束后，采用流式细胞仪检测DC标志DR和CD83，以CD3为标志来鉴定检测CIK细胞；回输前分别计数DC和CIK细胞。 1.3 治疗方法 自体造血干细胞移植造血恢复后1个月开始回输DC。回输前将DC均分，1份与CIK混合制成250 mL细胞悬液（内含1 500 U/mL 的IL2，体积分数0.01的清蛋白），经静脉回输；1份制成1.5 mL细胞生理盐水悬液，皮下注射到肿瘤邻近的淋巴结区。上述治疗每周进行1次，共3次。疗程结束后1个月随访观察疗效。观察治疗前后血清干扰素γ（INFγ）、白介素10（IL10）和白介素12（IL12）含量变化等。 1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0及PPMS 1.5[1]统计软件进行统计处理。 2 结 果 2.1 细胞表型检测和细胞计数 DC标志 DR和CD83的表达率分别为75%～84%和76%～85%，CIK CD3的表达率为88%～95%。每个疗程细胞总量：DC为(188.3±79.8)×106个，CIK为(58.8±22.3)×108个。 2.2 病人免疫指标观察 治疗前病人血清INFγ、IL10、IL12含量分别为（42.5±31.5）、（28.5±11.5）、（85.5±60.5）μg/L，治疗结束后1个月复查，病人上述指标分别为（65.0±45.0）、（30.1±18.1）、（89.1±71.1）μg/L，即治疗后血清中INFγ含量明显升高（t=3.679，P＜0.05），但IL10和IL12含量无显著改变（P>0.05）。 2.3 疗效及生存时间观察 12例恶性血液病病人中，7例持续完全缓解（CR），中位CR期44（32～56）个月。4例死亡，其中3例复发，1例ALL，2例非霍奇金淋巴瘤，复发后因年龄较大或未找到合适的异基因移植而死亡。1例M4病人复发，经半相合异基因造血干细胞移植（供者为其子）后病情缓解，目前持续完全缓解24个月。 .

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