内蒙地区汉族冠心病患者的分子遗传学研究

【摘要】 目的 探讨内蒙地区汉族冠心病患者的ACE基因I/N的多态性，并同汉族健康人群比较，分析其遗传特点。方法 54例冠心病患者的DNA应用ACE基因内含子16多态部位侧翼的前体进行PCR扩增。等位基因在琼脂胶上电泳，溴乙啶染色，紫外灯下观察。结果 患者的DD、DI 和Ⅱ基因型的频率是 0.57、 0.18和 0.24，汉族健康人群的DD、DI 和Ⅱ基因型的频率是 0.33、 0.31和 0.35。冠心病患者DD基因型及DD等位基因频率显著增高。结论 在北方汉族人群的研究中发现ACE基因I/N的多态性与冠心病相关。

【关键词】 ACE基因; 多态性; 冠心病

【Abstract】 Objective To investigate the insertion/deletion （I/N） polymorphism of angiotensin converting enzyme （ACE） with CHD in Han， and analysis their genetics characteristics. Methods 34 patients genomic DNA was amplified by polymorphic region in intron 16 of the ACE gene. Allele were detected on agarose gel stained with ethidium bromide.Results The frequencies of DD，DI and II genotype were 0.57， 0.18 and 0.24in CHD ; and 0.33， 0.31 and 0.35 in the control respectively. Conclusion The polymorphism of ACE gene are associated with CHD in Hans.

【Key words】 angiotensin-converting enzyme gene； polymorphism; CHD

冠心病是一种多基因疾病，它的基因的定位及其相关研究已成为当前和今后一段相当长时期内备受关注的焦点和难点。广东的一项研究表明，携带血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因DD型老年人患冠心病的危险增加。人类ACE基因位于染色体17q23上，其长度为21 Kb，包含26个外显子和25个内含子，在ACE基因存在多个变异位点。近年来，备受注目的是位于ACE基因16内含子的长度为287bp的Alu序列的插入I或缺失D多态性。1990年Rigat等［1］观察到ACE基因I／D多态决定约血清ACE活性水平的一半。此后，ACE I／D多态与冠心病、糖尿病及并发症的关联研究是该研究领域的热点，研究结果几乎都发现ACE基因的I／D多态性具有种族、民族和地域的差异性［2］。这种多态性与冠心病是否有关，两个相互矛盾的结论相继报道［3］，为此，我们对内蒙地区汉族冠心病人群进行了ACE基因多态性的分布研究，目的在于探讨ACE基因的I／D多态性与内蒙地区汉族冠心病患者的相关性。

1 资料与方法

1．1 一般资料 血液标本采自内蒙古健康的汉族88例，内蒙地区汉族冠心病患者组（CHD组）54例。患者入选标准：（1）有明确的心肌梗死病史，有过典型的心绞痛发作。（2）有典型的心肌缺血异常心电图。（3）冠状动脉造影证实有一支以上血管狭窄。（4）平均年龄 57岁。

1．2 方法 按常规［4］从外周血细胞中抽提DNA后，据Rigat et al［5］方法作PCR扩增，所用的引物核苷酸序列为：5’-CTGGAAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’和5’-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’，反应是在终体积10μl，液体中进行，包括1μl，前体（3.75 Pmol），dNTP（250μM） 1μl。Taq酶0.5unit，10×buffer 1μl DNA模板0.2μg/μl加10×buffer，扩增在92℃预变性2 min，94℃变性1min，58℃退火45s， 72℃延伸 1min共 32个周期， PCR产物在 2％琼脂糖凝胶上电泳，紫外光下观察结果。计算实验组ACE基因I／D多态的基因型频率，确认其符合遗传平衡（哈迪一温伯格平衡），由基因型计算等位基因频率。

2 结果

本研究人群中基因型分布经计算符合Hardy-weiberg 平衡。内蒙地区汉族冠心病患者和健康人的ACE基因I/N的多态性分布见表1。

结果表明，冠心病患者的DD、DI 和 II 基因型的频率是 0.57、 0.18和 0.24，汉族健康人群的DD、DI 和 Ⅱ基因型的频率是 0.33、 0.31和 0.35。患者组等位基因型频率D和I分别为是0.66和0.33，汉族健康人群的是0.49和0.51。这一结果经统计分析显示冠心病患者的DD基因型频率及D等位基因频率显著增高（P=0.004，P=0.012）。病例组I等位基因频率显著低于对照组 （P＜0.01）。 表1内蒙地区汉族冠心病患者和健康人的ACE基因I/N的多态性分布

3 讨论

近年来，ACE基因普遍被认为是研究高血压、冠心病等遗传易感性的主要候选基因 ［1，6］。2003年Barry R. Palmer，等［3］对新西兰心梗患者作了ACE I／D多态性的研究，结果表明心梗病组DD基因型频率较对照组高。英国伦敦大学学院和皇家自由医学院Muthumala等报告，血管紧张素转换酶（ACE）基因I/D多态性与收缩压（SBP）的交互作用影响健康中年男性冠心病（CHD）发病风险［6］。而在中国南方汉族冠心病患者做的研究，结果是冠心病组ACE基因及等位基因频率与对照组差异无显著性。另外其他不同民族的研究中发现ACE基因的I／D多态性与冠心病无明显关系［7］。我们研究所得到的结果无论是基因型频率还是等位基因频率，内蒙地区汉族冠心病患者与汉族健康人群ACE基因的I／D多态性差异均有显著性。在冠心病患者的进一步研究中发现，北方汉族人群中具DD基因型者伴血压高的发生CHD的风险为非DD型者的3.2倍；具D等位基因型者发生CHD的风险为具有I型等位基因者的2.05倍。因此，提示ACE基因的I／D多态性与内蒙古地区冠心病有明显关系。要想进一步探明其相互间的关系，尚需扩大样本数，从单个基因入手，逐渐延伸到整个肾素血管紧张素醛固酮系统中的全部基因，同时要考虑ACE基因I/D多态性与其他因素的交互作用，以便作更深入的研究。

【参考文献】 1 Rigat B， Hubert C， Alhenc GF， et al. An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin I converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels.J Clin Inest， 1990， 86:1343-1346. 2 Ishigami T，Iwamoto T， Tamura K，et al.Angiotensin I converting enzyme gene polymorphism and essential hypertension in Japan，Ethnic difference of ACE gene type. Am J Hyperten， 1995，8（1）:95-98. 3 Juan R， Helene B， Nadine C，et al.Insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin I converting enzyme gene is strongly associated with coronary heart disease in non-insulin-dependent diabetes mellitus.Proc Natl Acad Soi.USA， 1994，91:3662-3665. 4 Rigat B， Hubert C， Corvo P， Soubrier F. PCR detection the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin I converting enzyme gene（DCPI，depetide carboxyl peptidase I）.Nucleic Acids Res， 1992，20（6）:1433. 5 Rigat B， Hubert C，Alhege F，et al.An insertion/deletion polymorphism in angiotensin converting enzyme gene associaton infaction. Lance， 1993，141:991-999. 6 Muthumala A M.Angiotensin-converting enzyme genotype interacts with systolic blood pressure to determine coronary heart disease.Risk in healthy middle-aged men. Hypertension，2007，50（2）:348-353. 7 艾力曼·马合木提，迪丽努尔，卡丽毕努尔，等. 新疆维吾尔族血管紧张素转换酶基因多态性与冠心病关系的研究. 中华心血管病杂志， 2004，32（12）：1143.