新型多酸化合物POM2的毒理学安全性评价

作者：张洪，于洗河，李娟，李厨荣，吴文杰，李静

【摘要】 目的 评价新型多酸化合物(POM2)的安全性，为其应用提供毒理学安全依据。方法 依据新药临床前毒理学评价方法进行小鼠经口急性毒性试验、遗传毒性试验、大鼠30d喂养试验。结果 小鼠经口急性毒性试验半数致死量为868.96mg/kg，属于低毒化合物；小鼠骨髓微核试验、骨髓染色体畸变试验及Ames试验结果均为阴性；大鼠30d喂养试验未见明显有害效应，与对照组比较大鼠的生长发育、血液常规、血液生化及脏体比等指标均无显著差异。结论 化合物POM2毒性低，无明显的致畸及致突变作用，具有深入研究开发的价值。

【关键词】 新型多酸化合物POM2；微核试验；骨髓染色体畸变试验；Ames试验；毒理学

多酸化合物是一类具有Keggin 结构的金属簇化合物，亦是一类多核配合物[1]。是对多种RNA病毒有较强抑制作用的非核苷类似物，其抗病毒作用主要体现在抗HIV、流感、SARS和HBV方面[25]。我们在对多酸化合物抗病毒作用研究的基础上，制备得到了具有较强抗HBV活性的新型多酸化合物POM2。本文依据新药临床前毒理学评价方法探讨其毒理学安全性，为该化合物的进一步开发应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 样品

新型多酸化合物POM2由吉林大学公共卫生学院提供，用蒸馏水配制成实验所需浓度。

1.2 实验动物及菌种

清洁级昆明种小鼠，体重(20±2)g；SD大鼠体重(200±20)g，均由吉林大学实验动物中心提供。Ames试验标准菌株由哈尔滨医科大学公共卫生学院提供，生物学性状符合菌株要求。

1.3 实验分组

1.3.1 急性毒性试验

昆明种小鼠48只，雌雄各半，随机分为6组，最高剂量组为1256mg/kg，最低剂量组为500mg/kg，组间距i=0.08。

1.3.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 昆明种小鼠50只，雌、雄各半，分为POM2高、中、低3个剂量组(400mg/kg、16mg/kg、8mg/kg)及阴性对照组(NEC，蒸馏水)、阳性对照组(POC，环磷酰胺)，每组10只。

1.3.3 小鼠骨髓染色体畸变实验

昆明种小鼠50只，雌、雄各半，分为POM2高、中、低3个剂量组(400mg/kg、16mg/kg、8mg/kg)及阴性对照组(NEC)、阳性对照组(POC)，每组10只。

1.3.4 大鼠30d喂养试验

SD大鼠120只，雌雄各半，随机均匀分为POM2高、中、低3个剂量组(80mg/kg、16mg/kg、8mg/kg)和对照组(NEC)，每组30只。

1.3.5 Ames试验 POM2设5个剂量组(5.000mg/皿、2.500mg/皿、1.250mg/皿、0.625mg/皿、0.313mg/皿)和正常对照组(NC)、阴性对照组(NEC)、阳性对照组(POC)。

1.4 方法

按文献[6]方法进行小鼠经口急性毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠染色体畸变试验、鼠伤寒沙门氏菌微粒体Ames试验、大鼠30d喂养试验。

1.5 统计学处理

用统计软件SPSS13.0对骨髓嗜多染红细胞微核试验和染色体畸变试验数据行卡方检验；大鼠30d喂养试验数据行重复测量资料和单因素方差分析。

2 结果

2.1 小鼠经口急性毒性试验

采用Bliss法计算出POM2半数致死剂量LD50=868.96mg/kg。LD50(Feiller校正)95%的可信限为755.24至1065.2mg/kg，根据毒理学安全性评价标准[78]，POM2属于低毒化合物。

2.2 遗传毒性试验结果

2.2.1 小鼠骨髓微核试验结果

POM2各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较，经χ2检验差异无显著性(P>0.05)，而POM2各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阳性对照组比较差异具有显著性(P<0.05)，此结果提示POM2未显示出对小鼠骨髓嗜多染红细胞染色体的断裂效应及纺锤体毒效应。结果见表1。表1 小鼠骨髓微核实验结果（略）

2.2.2 小鼠骨髓细胞染色体畸变试验结果

POM2 各剂量组小鼠骨髓细胞染色体畸变率与阳性对照组比较，经χ2检验差异无统计学意义(P>0.05)，即受试样品染色体畸变率为阴性，而与阳性对照组比较差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。此结果提示POM2对小鼠骨髓细胞染色体没有致畸作用。结果见表2。表2 小鼠骨髓细胞染色体畸变实验结果（略）

2.2.3 Ames试验结果

Ames试验结果显示，受试物各剂量组平均回变菌落数均未超出平均自然回变菌落数的2倍以上，而阳性对照组平均回变菌落数均超过其相应平均自然回变菌落数2倍以上，由此可见POM2不能使鼠伤寒沙门氏菌移码突变株和碱基置换突变株发生回复突变的现象，未呈现遗传毒性。结果见表3。表3 Ames试验结果（略）

2.3 大鼠30d喂养试验

2.3.1 一般观察

试验期间对照组与POM2各剂量组大鼠均未出现异常症状和体征，也无死亡。

2.3.2 POM2 对大鼠体重及脏器系数的影响 经30d喂养后POM2各剂量组大鼠的体重增长指标数据经方差分析与对照组比较无明显差异；POM2各剂量组脏器系数经单因素方差分析与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)，此结果提示POM2对大鼠脏器无明显影响。

2.3.3 POM2对大鼠血液常规及血液生化指标的影响

POM2各剂量组血液常规指标经单因素方差分析与对照组比较红细胞、白细胞计数等差异均无显著性， 此结果提示POM2对大鼠血液学指标无明显影响，无毒理学意义。血液生化指标如尿素氮、肌酐、血糖及总蛋白等与正常对照组比较差异均无显著性，也无剂量效应关系，此结果提示POM2未对大鼠肝脏、肾脏造成损伤。

2.3.4 大鼠脏器病理分析

经显微镜下观察，受试动物主要脏器心、肝、脾、肺、肾组织结构均正常，细胞形态未见明显病理改变，即无药物引起的病理组织变化。停药后，对照组和低剂量给药组各有一只动物可见肺组织炎症改变，其他脏器组织结构正常，细胞形态未见明显的病理改变，此结果提示POM2对动物主要脏器未形成明显损伤。

3 讨 论 毒理学安全性评价是通过动物试验和对人群的观察，阐明待评物质的毒性及潜在的危险，决定其能否进入市场或阐明安全使用的条件，以达到最大限度的减小其危害作用、保护人民身体健康的目的[9]。急性毒性试验可了解受试物的毒性强度、性质和可能的靶器官，POM2急性毒性试验结果显示给药后实验动物无明显中毒反应，根据化合物的急性毒性分级标准[6]，其属低毒性物质。遗传毒性试验中我们根据不同的遗传终点，按原核细胞与真核细胞、体内与体外试验相结合的原则，选择了反映基因突变的Ames试验，反映哺乳类动物体细胞染色体损伤作用的小鼠骨髓微核试验和畸变试验。POM2的上述三项试验结果均为阴性，提示该化合物对基因、哺乳类动物体细胞染色体无损伤作用。30d喂养试验结果表明，与对照组比较大鼠的生长发育、血液常规、血液生化及脏体比等指标均无显著差异，提示POM2对肝、肾、血液等无明显毒性作用。本实验研究为POM2的应用提供科学依据。