杜仲提取物的亚慢性毒理学研究

作者：刘月凤，陈建文，龚朋飞，袁慧

【关键词】 杜仲；，，亚慢性毒性

摘要：目的研究不同剂量的杜仲提取物水溶液对小鼠亚慢性毒性作用，为临床应用提供依据。方法给实验小鼠灌服不同剂量的杜仲提取物水溶液。在实验中、末期停药后24 h，分别取血测定血液学、血液生化和主要脏器指标，并作病理切片。结果灌胃中、低剂量（2.06 g/kg，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液，能够提高小鼠血红蛋白含量和红细胞数（P＜0.01），对白细胞分类计数无影响，同时能够提高小鼠体重、总蛋白及白蛋白含量（P＜0.01），对脾脏、肝脏、心脏、肺脏、肾、性器官指数及血清酶活性无影响（P＞0.05）。结论杜仲提取物对受试动物未见有明显毒性作用。

关键词：杜仲； 亚慢性毒性

Studies on the Subchronic Toxicology of Eucommia ulmoides Extract

Abstract：ObjectiveTo research the effect of Eucommia ulmoides extract solution on mice subchronic toxicity，to provide basis for clinical use.MethodsGave experiment mice different doses of Eucommia ulmoides extract solution，in mediumterm and after administration for 24 h， blood physiological， blood chemistry，the main viscera coefficient were tested.ResultsBy gastrogavage，the middle and low dose of Eucommia ulmoides extract solution improved the content hemoglobin(Hb) and red blood cell count，but had no effect on white blood cell count (P＜0.01). It increased mice weigt、total protein content、white protein content (P＜0.01) ，but had no effect on indexes of spleen， live， heart， lung， kidney， sexual organ and the activation of serum enzyme (P＞0.05) .ConclusionEucommia ulmoides extract has no toxicity to mice.

Key words:Eucommia ulmoides; Subchronic toxicity 我国对杜仲（Eucommia ulmoides）的利用历史悠久，近几年我国学者在杜仲的生物学、化学成分、生理生化等方面做了许多研究，已知杜仲的化学成分主要有：（1）木脂素类；（2）环烯醚萜类；（3）酚类化合物等，唐建军［1］、李家实等［2］认为，杜仲中有效成分对动物血压有双向调节功能。唐建军等［1］报道：杜仲含有丰富的VE和 β-胡萝卜素，有延缓衰老、增强机体免疫体力作用。为了更好地开发利用杜仲，我们探索了张家界产杜仲提取物（以下简称杜仲提取物）对动物亚慢性毒性作用，并为临床应用提供一定的理论依据。

1 材料

1.1 药品与动物杜仲提取物：主要成分：80%氯原酸，由张家界恒兴生物科技公司提供。昆明种小鼠，雌雄各半，体重（20±2）g，8周龄，购于湖南中医学院实验动物中心，批号：990218。

1.2 仪器ES-C300A电子天平，湘仪天平仪器厂。MD-100自动生化分析仪器仪。美国 Leyte Drive Torranle化学仪器公司生产。

2 方法与结果

2.1 小鼠最大耐受量采用最大给药量［3］法，在预试基础上，取小鼠100只，雌雄各半，体重（20±2）g，随机分成5组，分次灌服不同剂量杜仲提取物水溶液0.5 ml/次，观察7 d内动物死亡数，同时观察动物一般状况及活动情况。结果见表1。动物在7 d内均无异常反应，考虑到杜仲的浓度以及小鼠的灌胃容积都已达到最大，因此，杜仲提取物的小鼠灌胃最大给药量应大于18.52 g/kg。按小鼠的平均体重为20 g，成人平均体重60 kg，成人每日用量6~9 g［4］计算，小鼠的最大耐受倍数=18.52×60/9=124（倍），故认为本药具有较大的安全性。

2.2 杜仲提取物对小鼠的亚慢性毒性实验［5，6］取健康小鼠80只，体重为（20±2） g，雌雄各半，分笼颗粒饲料喂养，将小鼠随机分为3个剂量组6.17，2.06，0.69 g/kg和1个对照组（生理盐水）。各组分别以0.5 ml/次容量灌胃：1次/ d，连续8周，每周停药2 d，期间每周称重，并根据体重调整药量。同时观察动物的一般体征。实验中、末期停药后24 h，测定血液学指标 Hb，RBC，WBC和白细胞分类计数（DC）及血液生化指标（TP，ALB，AST，ALT，BUN，ALP和GLu），两次采血后分两批处死动物，对（心、肝、脾、肺、肾、性腺）主要脏器计算脏器重量系数，并做病理切片检查。

表1 小鼠灌胃给药最大耐受量（MTD）的测定(略)

2.2.1 杜仲提取物对小鼠体重的影响结果由表2可看出，各组小鼠在第4，8周时，中、低剂量组（2.06，0.69 g/kg）与对照组差异极显著（P＜0.01），出现明显的增重。第8周时，高剂量组与对照组差异不显著（P＞0.05）。

2.2.2 小鼠血液学指标的变化结果见表3。由表3可知，实验第4，8周时，浓度为2.06，0.69 g/kg杜仲的提取物能够显著提高小鼠的Hb含量及RBC（P＜0.01）。在6.17 g/kg的浓度水平下，第4周杜仲提取物显著提高小鼠的 Hb含量及RBC（P＜0.05），第8周与对照组比较无显著差异（P＞0.05）；实验组N，L，E，M计数与对照组比较均差异不显著（P＞0.05）。

2.2.3 杜仲提取物对小鼠血液生化指标的影响结果见表4。由表4可知，第4，8周，中、低剂量组TP、ALB含量均极显著的高于对照组（P＜0.01）。TP含量高剂量组第4周高于对照组（P＜0.05），第8周则无差异显著性（P＞0.05）；ALB含量第4周与对照组比较差异不显著（P＞0.05）；第8周低于对照组（P＜0.05）；G的含量第4周高剂量组和第8周各组高于对照组（P＜0.05）；BUN含量高剂量组与对照组相比差异显著（P＜0.05），中、低剂量组与对照组无显著差异（P＞0.05）。

表2 小鼠平均体重变化(略)

每组均与对照组比较，*表示5%的显著水平，**表示1%的极显著水平（下同）

表3 小鼠血液学指标(略)

动物数上排为给药后4周，下排为第8周停药后2 d（下同）

表4 小鼠血液生化指标(略)

2.2.4 杜仲提取物对小鼠主要脏器的影响由表5可知，各实验组脏器指数与对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

表5 小鼠主要器官指数(略)

2.2.5 杜仲提取物对小鼠病理组织形态学的观察实验中、末期分别对小鼠进行剖检，观察各组织器官未见明显的眼观病理变化，对各组脏器进行镜检，均未见有意义的病理组织学改变。

3 讨论

通过MTD实验观察，小鼠精神状态良好，无死亡发生，给药后的第8天处死动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等均无异常发生，说明小鼠对杜仲提取物MTD应大于18.52 g/kg，相当于体重为60 kg的成人用量（6~9 g）的124倍。根椐有关资料［7］，中药的安全性以小鼠能耐受人用量的100倍以上为安全，故认为本品具有很大的安全性。对小鼠体重检测表明：中、低剂量（2.06，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液能极显著提高小鼠的体重（P＜0.01），高浓度的杜仲提取物长时间饲喂小鼠无增重作用。王介庆等［8］用杜仲活性成分提取液对肉鸡增重实验中也有增重，本研究结果证实了这一点。血液学指标检测表明：中、低剂量杜仲提取物水溶液能极显著提高小鼠的 Hb含量和RBC（P＜0.01）。高剂量（6.17 g/kg）的杜仲提取物水溶液在第4周时显著提高小鼠的红细胞数、血红蛋白含量（P＜0.05），第8周时则无此作用。杜仲提取物对小鼠WBC及WBC的分类计数无明显影响。血液生化检测结果表明：中、低剂量杜仲提取物水溶液能极显著提高TP，ALB的含量，对血清酶AST，ALT的活性无明显影响，这说明机体的新陈代谢加强，对养分的利用率升高，从而促进了小鼠的生长。高剂量杜仲提取物水溶液在第4周时能提高TP，ALB含量，第8周时则无此作用，但却提高了AST，ALT的活性，结合有关资料［9］，推测高剂量的杜仲提取物有可能影响了肝脏的功能，从而使机体的养分利用降低。BUN的含量在杜仲提取物浓度为2.06，0.69 g/kg时无显著性差异，在高剂量作用下，明显升高，推测高剂量时有可能使肾机能受到影响。实验期对ALP及GLu的含量无明显影响，说明6.17 g/kg剂量以下的杜仲提取物对ALP及GLu无影响。脏器指数检测结果表明：本品对脾脏、肺脏、心脏、肾脏、性器官指数无明显影响，说明杜仲提取物在6.17 g/kg剂量水平以下，不损害以上脏器。以上实验结果可知，张家界产杜仲提取物对受试动物无明显毒性作用。

［1］ 唐建军，张禄源，何鸣筱，等.杜仲的研究与应用进展［J］.植物学通报，1998，（15）6：47.

［2］ 李家实，阎玉凝.杜仲皮与杜仲叶化学成分初步研究［J］.中药通报，1986，11（8）：41.

［3］ 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南（药学、药理学、毒性学分册）［M］.1994：205.

［4］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：131.

［5］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：113.

［6］ 张 铣，刘毓谷.毒理学［M］.北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1997：230.

［7］ 秦伯益.新药评价概论，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1998：154.

［8］ 王介庆，王洪斌，朱鉴生.杜仲活性成分提取液在家禽生产中的应用［J］.中国家禽，1999，21（6）：29.

［9］ 陈 龙，高 伟，王怡丰等.CCL4诱发肝损伤过程中血液细胞免疫功能的变化［J］.环境与健康杂志，2001，18（2）：83.