天麻镇眩颗粒毒理学实验研究

作者：胡琼力 陈宝田 崔桂梅

【摘要】 ［目的］观察动物天麻镇眩颗粒的急性毒性和长期毒性。［方法］以最大可灌浓度、最大体积的天麻镇眩颗粒溶液1d内灌服小鼠1次，测定最大耐受量，并推算出相当临床人用量的倍数。以高、中、低剂量的天麻镇眩颗粒溶液经胃灌服大鼠，连续12周。观察大鼠的生长发育、血液学、生化学、心肝肾功能、脏器系数、组织病理变化及停药2周后，上述指标的变化。［结果］小鼠1d内1次经胃灌服受试物的最大耐受量＞140g/kg。长期毒性试验高剂量组雌性大鼠用药第5周出现脱毛，2周后恢复。高剂量组大鼠给药后24h血小板、白细胞、淋巴细胞高于对照组，统计结果有显著性差异，停药后2周以上三项恢复，与对照组比较未见显著性差异。［结论］天麻镇眩颗粒对血液学的影响是可逆的，连续口服给药较安全。

【关键词】 天麻镇眩颗粒；急性毒性试验；慢性毒性试验

Abstract：［Objective］To observe the acute and chronic toxicity of Tianmazhenxuan Granules.［Method］Oral maximal tolerance dose(MTD) was determined for mice.The chronic toxicity was performed in rats， the treatment groups(large， middle， small dose of Tianmazhenxuan Granules) and control group were made.After continuously feeding rats orally for 12 weeks， we observed the rats′appearance， behavior， blood， organ coefficient and pathologic changes of organ.The above physiological signs were inspected again 2 weeks after cease of feeding.［Result］MTD＞140g·kg-1.In the chronic toxicity experiment，the hair of female rats in large dose shed at the 5th week of administration， but after 2 weeks they all recovered.24 hours after feeding， the rats′platelet， white blood and lymph cell of high dose group were higher than control group， and had remarkable difference in statistics.2 weeks after cease of feeding， the above indexes returned to normality.Compared with the control group， there was no remarkable difference in statistics.［Conclusion］The present studies show that it is safe to take Tianmazhenxuan Granules for administration.

Key words：Tianmazhenxuan Granules；acute toxicity；chronic toxicity test

天麻镇眩颗粒是在陈宝田教授的经验方――镇眩汤基础上加天麻，用科学的方法提取有效成分经特殊工艺精制而成的纯中药复方制剂，处方符合中医标本兼治、辨证施治的理论，有较好的临床基础。天麻镇眩颗粒具有健脾利湿，养血活血，祛痰定眩，平肝潜阳等功用，临床上用于治疗耳源性眩晕，即现代医学的美尼尔氏综合征，属于中医的“眩晕”范畴。毒理学研究是新药进入临床前必不可少的环节，为新药的安全性提供了依据，现将其毒理学研究结果报告如下。

1 材料

1.1 药物 天麻镇眩颗粒，4g生药/g颗粒，由南方医院制药厂提供，批号：20060809。实验前用负离子水配成87.5％、43.8％、21.9％浓度的溶液，置4℃冰箱保存备用，实验时采用不同浓度等体积灌胃给药。

1.2 动物 昆明小鼠40只，体重20±2g，雌雄各半。实验动物合格证号：0016417。Wistar大鼠80只，体重90～120g，鼠龄6～8周，雌雄各半。实验动物合格证号：0016556。以上动物均由南方医科大学动物中心提供。

2 方法［1］

2.1 小鼠急性毒性试验 根据预试验结果，未测出天麻镇眩颗粒LD50，因此只做最大给药量试验。40只小鼠随机分成2组，即天麻镇眩颗粒组和空白对照组，每组20只，雌雄各半。禁食、不禁水12h后，天麻镇眩颗粒组以87.5%浓度，0.8ml/20g体积（最大允许容量、最大可灌浓度）经胃一次性灌服天麻镇眩颗粒溶液，剂量为35g/kg(相当于生药140g/kg)。空白对照组给予等容积负离子水。给药当日，严密观察小鼠外观、行为活动、呼吸、分泌物、排便、死亡等情况，常规饲养并观察7d，称取体重，记录死亡及毒副反应症状。试验结束时，将全部动物处死、解剖，肉眼检查各主要脏器组织病变情况，计算最大耐受量，并记录结果。

2.2 长期毒性试验 Wistar大鼠80只，随机分成天麻镇眩颗粒高、中、低剂量组及对照组4组，每组雌雄各10只，试验前观察1周。受试药物按60kg成人每天服用180g等效换算，高、中、低剂量组分别等效于成年人用量的40、20、10倍，即分别为0.68g/kg、1.35g/kg、2.7g/kg（相当于生药2.7g/kg、5.4g/kg、10.8g/kg），给药体积均为3ml/kg。连续给药12周，每日上午给药，每2周称量记录体重一次，并适时调整给药剂量。试验期间逐日记录消耗的饲料重量、大鼠外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应（中毒反应的症状、严重程度、起始时间、持续时间、是否可逆）等。最后一次给药后24h每组处死10只大鼠（雌雄各半）检测血液学包括红细胞（RBC）、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)、白(WBC)细胞及其分类，心肝肾功能包括尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、肌酸激酶（CK），生化学包括钾（K）、钠（Na）、氯（Cl）、总蛋白（TP）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHOL），并进行系统尸解，秤取脏器重量包括心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫，计算脏器系数，肉眼观察病理变化，并将各脏器、组织石蜡包埋、切片、镜下观察病理变化。每组留下10只大鼠（雌雄各半）继续观察2周，再处死检查以上各指标。

3 结果

3.1 急性毒性试验结果 天麻镇眩颗粒以87.5％浓度，0.8ml/20g体积1d1次经胃灌服给药后观察7d，小鼠外观、行为活动、进食进水、呼吸、分泌物、排便未见异常，未有小鼠死亡。给药前给药组与对照组体重（g）分别为26.05±3.22、24.50±2.76，给药后第8天给药组与对照组体重（g）分别为30.45±4.40、27.60±3.03，组间比较无显著性差异。肉眼尸检心、肝、脾、肺、肾、胃肠等主要脏器组织未见明显异常。测得最大耐受量≥140g/kg，此剂量是临床成人（以60kg计算）每日口服剂量3g/kg的47倍。

3.2 长期毒性试验结果

3.2.1 对大鼠一般行为及体重的影响 用药第5周高剂量组雌性大鼠出现脱毛现象，2周后毛发恢复正常。其余各组一般体征、外观、进食进水、分泌物、排便等与对照组比较未见明显异常。高、中、低剂量各组给药后24h与停药后两周体重增长与对照组比较无显著性差异。具体结果见表1。

表1 天麻镇眩颗粒给药不同时间对大鼠体重增长的影响（略）

以上各组与对照组比较，P＞0.05

3.2.2 对大鼠脏器系数的影响 高、中、低剂量组各脏器系数在给药后24h及停药后2周与对照组比较均未见显著性差异。结果见表2。

表2 天麻镇眩颗粒对大鼠主要脏器系数的影响（略）

以上各组与对照组比较，P＞0.05

3.2.3 对大鼠血液学影响：高剂量组大鼠给药后24小时血小板、白细胞、淋巴细胞高于对照组，统计结果有显著性差异，停药后2周以上三项恢复正常，与对照组比较未见显著性差异。中剂量组与低剂量组给药后24h与停药后2周的血液学指标与对照组比较均无显著性差异。结果见表3。

表3 天麻镇眩颗粒对大鼠血液学的影响（略）

与对照组比较，**P＜0.01，*P＜0.05，其余数据P＞0.05

3.2.4 对大鼠心肝肾功能影响 高中低剂量组给药后24h与停药后2周心肝肾功能指标与对照组比较均无显著性差异。结果见表4。

表4 天麻镇眩颗粒对大鼠心肝肾功能的影响（略）

以上各组与对照组比较P＞0.05

3.2.5 对大鼠血液生化影响 高中低剂量组给药后24h与停药后2周血液生化指标与对照组比较均无显著性差异。结果见表5。

表5 天麻镇眩颗粒对大鼠血液生化的影响（略）

以上各组与对照组比较P＞0.05

3.2.6 对Wistar大鼠重要脏器的病理剖检及组织学镜检结果P 连续灌服受试样品12周后，处死大鼠，作病理学剖检内脏并进行观察，结果描述如下。（1）头颅：颅骨无畸形，软硬脑膜、脑垂体无异常，脑沟和脑回深浅正常，脑室结构清楚。（2）心：心外膜光滑，无出血点，心肌厚薄及色泽未见异常，未见心肌细胞结构坏死或疤痕，心瓣膜厚薄正常，腱索未见粘连，心内膜光滑，冠脉未见狭窄或硬化。（3）肝：色泽暗红，表而光滑润泽，肝小叶结构清楚，门静脉区无变化，未见主要静脉扩张，胆道内无结石，胆管腔形态正常。（4）肺：左右两肺大小、硬度、色泽均正常，切而轮廓整齐明确，未见肺褐色硬变，未见支气管、血管异常变化。（5）脾：硬度色泽均正常，切而轮廓整齐明确，未见异常变化。（6）肾：左右肾大小及硬度色泽均正常，切而光滑，未见包膜粘连，切面皮、髓质交界明确，皮层条纹清楚，输尿管内未见结石，肾动脉壁未见异常。（7）睾丸：大小、质量及硬度均正常，睾丸曲精小管具弹性(可用镊子拉引出来)，附睾、精束和尿道口未见异常。（8）子宫及卵巢：子宫位置、大小、形状等均未见异常；未见输卵管与邻近脏器粘连，腔内未见阻塞，卵巢大小正常，两侧对称，色泽正常。

上述组织块作常规组织学固定、切片、染色，光学显微镜下观察，结果如下：（1）心肌纤维结构清楚，未见心肌变性、坏死、水肿或炎变，未见疤痕;未见粘液或纤维样变性，未见风湿小结;瓣膜亦未见粘液水肿，未见灶性细胞坏死性或炎性细胞浸润，未见肉牙等组织形成或胶原纤维增生等现象。（2）肝细胞轮郭及内部结构清晰，未见细胞膨胀及炎性细胞浸润。（3）肺未见肺泡膨胀，间隔变窄，间孔变大等现象，未见小支气管炎性病变或炎性细胞浸润；未见肺泡壁毛细管扩张充血水肿或肺泡内充满渗出物。（4）肾包膜正常无粘连，肾皮质与髓质分界清楚，肾盏肾盂大小正常，未见肾小球上皮细胞增生或脂变、肿胀；未见肾组织破坏、充血、水肿或炎性细胞浸润。（5）睾丸细胞排列正常;结构未见异常；未见器质性病变或炎症。（6）子宫未见腺上皮过度增殖，未见绒毛间质高度水肿或绒毛间质内血管消失，未见滋养层上皮细胞高度增生。（7）卵巢皮质髓质结构清楚，未见组变性或炎变，未见卵巢囊肿或实质瘤。

以上剖检观察及病理学镜检表明，受试样品天麻镇眩颗粒高剂量组和空白对照组大鼠的主要脏器没有发现有毒性反应及病理性损害的改变。

4 讨论

天麻镇眩颗粒的初步药效学研究结果证明其有镇静、催眠、利尿、镇吐等药理作用［2］。为了对天麻镇眩颗粒的安全性做出科学的评价，为临床试验用药提供科学的依据，保证临床用药安全，天麻镇眩颗粒在临床试验前进行动物毒理学研究必不可少［3］。急性毒性试验结果表明小鼠1d1次经胃灌服天麻镇眩颗粒溶液外观、行为活动、进食进水、呼吸、分泌物、排便未见异常，未有小鼠死亡。测得最大耐受量≥140g/kg，此剂量是临床成人（以60kg计算）每日口服剂量3g/kg的47倍。长期毒性试验高剂量组雌性大鼠用药第5周出现脱毛，2周后毛发又长出，说明脱毛现象可恢复。高剂量组大鼠给药后24h血小板、白细胞、淋巴细胞高于对照组，统计结果有显著性差异，停药后2周以上三项恢复正常，与对照组比较未见显著性差异，说明天麻镇眩颗粒对血液学的影响是可逆的。其余各项指标高、中、低各组与对照组比较均未见显著性差异。对大鼠重要脏器的剖检及组织学镜检未发现有病理性改变，提示在上述实验条件下，天麻镇眩颗粒无明显毒副作用，服用安全。

【参考文献】

［1］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1996.

［2］ 国家药品监督管理局.中药新药研究的技术要求（五：毒理研究）［S］.1999：2425.

［3］ 崔桂梅，陈宝田，胡琼力.天麻镇眩颗粒的镇静催眠作用［J］.广东医学，2007，28（10）：1599.