生血宁的生殖毒理学试验研究Ⅲ——围产期毒性试验

作者：吴瑜，王树荣，王根才，刘振斌，罗京

【摘要】 目的 观察生血宁围产期给药对成年小鼠及仔鼠的影响。方法 将试验小鼠分为生血宁大、中、小剂量组和对照组，在雌性小鼠妊娠后第15 天至分娩后21天连续给药灌胃给予生血宁，观察孕鼠围产期情况、产仔率及仔鼠的生理发育情况、神经反射功能、行为活动及生育能力。结果 仔鼠情况良好，未见明显异常。结论 生血宁对小鼠无围产期毒性作用。

【关键词】 生血宁；围产期；毒性

Abstract:Objective To observe the effects of administration of Shengxuening tablets in perinatal period on neonatal mice and adult mice. Methods The animals were randomized into four groups， i.e.， the group administered at high dose， the group administered at the intermediate dose， the group administered at the low dose， and the control group. The test groups were intragastrically administered with Shengxuening tablets from the 15th day of pregnancy to the 21st day after labour，and conditions of pregnant mice in perinatal period and mouse birthrate， physiological development， nervous reflex， activity， and reproductive ability of the neonatal mice are observed. Results No obvious abnormality was observed in neonatal mice. Conclusion No obvious perinatal toxicity was observed in mouse administered with Shengxuening tablets.

Key words:Shengxuening tablets；perinatal period；toxicity

生血宁系以蚕砂为原料制备的中药二类新药，其主要成分为铁叶绿酸钠及叶绿素衍生物，主治缺铁性贫血（气血两虚证）［1，2］。临床试验表明生血宁对成人、儿童缺铁性贫血具有良好的疗效，且安全性良好［3～5］。为扩大适应人群范围，给妊娠期妇女用药提供安全性依据，本实验以《新药研制开发生产技术与药物临床、非临床研究管理手册》［6］为依据对生血宁进行了生殖毒理学研究。其中，围产期毒性试验主要侧重于研究生血宁对仔鼠安全性的影响，即在围产期给药观察对仔鼠的生理发育、神经反射功能、内脏器官、行为活动及生育能力是否有影响。 1 材料与方法

1.1 动物

SPF级昆明系健康小鼠，雌鼠160只，雄鼠80只，由山东大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（鲁）20030004，体质量为（25±3）g。动物购入后首先适应性饲养1周，动物交配前按照每饲养笼（面积40 cm×25 cm）放置5只雌性动物规模饲养；动物交配时按照雌雄动物2∶1比例放置过夜。生血宁片由武汉联合药业有限责任公司提供，批号20030101。

1.2 方法

1.2.1 给药方法

将生血宁以蒸馏水配置成混悬液备用。雌性鼠按体质量随机均衡分为4组，即高剂量组（H）、中剂量组（M）、低剂量组（L）以及空白对照组，分别按质量浓度为2.4％生血宁，0.6％生血宁，0.15％生血宁以及蒸馏水灌胃，灌胃容量均为20 mL/kg，按体质量给药则高、中、低剂量组分别为480 mg/kg、120 mg/kg、30 mg/kg，分别相当于临床人用剂量的80倍、20倍及5倍（按公斤体质量折算）。灌胃给药时间为雌鼠交配妊娠后第15天至分娩后21天。

1.2.2 观察指标

试验期间每天观察雌鼠的一般情况（包括活动、行为、排泄物、背毛、眼睛分泌物等），记录饮水量、摄食量、死亡数，观察动物交配行为，计算受孕率。雌鼠受孕后观察孕鼠体质量变化情况，孕鼠分娩时统计产仔率。

仔鼠出生后24 h内称量体质量，观察外观有无畸形，记录出生存活率、哺育成活率以及性别比例，并观察体质量变化。对仔鼠的生理发育指标检查包括：耳廓分离、门齿萌出、睁眼、腹毛生长、睾丸下降、阴道开口或张开，有无褶耳或开耳孔。神经反射功能检查包括：翻正反射、痛觉反射、视觉定位反射、听觉惊愕反射、嗅觉反射、触须定位反射、断崖回避反射、瞳孔反射、吸吮能力反射、尾部悬挂反射等。仔鼠断乳后通过自主活动试验、转棒试验、游泳试验以及跳台试验进行行为测试。仔鼠出生60 d后进行动物交配，观察雌鼠交配行为并计算雌鼠受孕率。

1.3 统计学方法

计量资料以(±s)表示，采用t检验，率的比较用χ2检验。

2 结 果

2.1 雌鼠和孕鼠的一般情况

雌鼠妊娠前后一般情况良好，无异常情况出现。生血宁各组及对照组小鼠妊娠受孕率正常，组间比较差异无显著性（P＞0.05），各组受孕小鼠在用药前后体质量增长速度正常，组间比较差异无显著性（P＞0.05），见表1。各组妊娠小鼠产仔率在88.5％～100％之间，生血宁高剂量组的产仔率稍低（88.5％），但组间比较差异无显著性（P＞0.05）。表1 孕鼠体质量变化情况和雌鼠受孕率、产仔率比较（略）

2.2 仔鼠一般情况

生血宁各组以及对照组仔鼠出生后一日存活率均在98.7％以上，仔鼠外观未见明显畸形。生血宁高剂量组的存活率较低（仅指哺乳第21天），但组间比较差异无显著性（P＞0.05），可能与高剂量组产仔数量多于其他各组，母鼠哺育有一定困难有关。生血宁各组以及对照组仔鼠的性别比例以及体质量增长速度方面未见异常情况，组间比较差异无显著性（P＞0.05）。见表2。表2 仔鼠在母鼠哺育下成活数量比较（略）

2.3 仔鼠生理发育指标、神经反射功能检查和行为测试

各组仔鼠生理发育指标检查以及仔鼠神经反射功能检查均未见异常。通过随机抽样检测生血宁各组以及对照组断乳仔鼠心脏、肺脏、脾脏、肾脏、肝脏、生殖器官重量系数未发现异常情况及畸形。通过随机抽样检测生血宁各组以及对照组仔鼠断乳后行为测试，试验数据显示组间比较差异无显著性（P＞0.05），见表3。表3 仔鼠断乳后自主活动情况比较（略）

2.4 仔鼠的生殖能力

生血宁各组以及对照组仔雌鼠生后60 d交配后受孕率在60.7％～67.6％之间，组间比较差异无显著性（P＞0.05），见表4。而且与各亲代母鼠受孕率（50.0％～65.0％）比较，似乎亲代仔雌鼠受孕率有轻微增高，但差异无显著性（P＞0.05）。表4 仔雌鼠生后60 d交配后受孕率比较（略）

3 讨 论

我国广大妊娠中晚期孕妇缺铁性贫血患病率在50%左右［7］，长期以来“孕妇缺铁不影响胎儿铁代谢”的习惯思维影响着人们。但有研究证实，孕妇轻度缺铁时对胎儿铁代谢没有影响，但孕妇缺铁较严重时，则可影响胎儿铁代谢，即孕妇对胎儿的铁供给是有限的，妊娠期间预防性地给予铁剂可有效地防治铁缺乏［7］。 目前治疗缺铁性贫血多采用传统的口服铁剂的方法，又以硫酸亚铁等二价无机铁盐和富马酸亚铁等有机铁盐为代表，对胃部刺激较大。 生血宁的结构和自然血红素结构极其相似，其功效成分——铁叶绿酸钠的结构与血红素相似，通过肠绒毛上的血红素受体，血红素铁可以被直接吸收，吸收率约20%～25%［8，9］，而非血红素铁和无机铁都必须经过解离为二价铁离子之后才能与肠腔中的转铁蛋白结合，再经肠黏膜上的受体吸收，进入肠黏膜细胞，吸收率仅1%左右［7］。人体通过吸收食物中血红素的机制来吸收生血宁，无毒性反应，而且吸收率高。临床试验结果显示无明显副作用，尤其没有一般铁剂所具有的胃肠道反应。本试验结果表明，生血宁无明显围产期毒性作用，即在围产期给药不会对仔鼠的生理发育、神经反射功能以及行为方式产生影响，也不会引起外观和内脏的异常或畸形。作为一种服用安全、方便的纯中药制剂，生血宁为妊娠中、后期缺铁性贫血患者提供了一种新的治疗选择。